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前言

在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，C18 96孔板被廣泛應(yīng)用于肽段脫鹽和純化步驟，尤其適用于高通量樣本處理，為下游質(zhì)譜分析提供高質(zhì)量樣本。

Empore™ C18 96孔板簡(jiǎn)介

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Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專(zhuān)為高通量固相萃取而設(shè)計(jì)，板的每個(gè)孔內(nèi)都有一個(gè)有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的預(yù)過(guò)濾層被壓環(huán)固定到每個(gè)孔的底部，預(yù)過(guò)濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實(shí)際使用直徑。標(biāo)準(zhǔn)板的單孔儲(chǔ)液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲(chǔ)液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過(guò)板的單孔儲(chǔ)液體積，可分批次加液。

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Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢(shì)

高通量、低樣本損失、兼容自動(dòng)化設(shè)備。
致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問(wèn)題，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高。
薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫，回收率更高。

C18 96孔板脫鹽原理

C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過(guò)疏水相互作用吸附肽段，去除鹽分、去垢劑等雜質(zhì)，隨后用有機(jī)溶劑洗脫肽段，實(shí)現(xiàn)脫鹽和濃縮。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1、材料與試劑

CDS Empore™ C18 96孔板（貨號(hào)：70-2007-3982-2EA，規(guī)格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）
緩沖液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;

洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。

真空抽濾裝置或離心機(jī)（適配96孔板）
肽段樣本（酶解后的復(fù)雜混合物）

2、板預(yù)處理

活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜置1分鐘，抽干。
平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重復(fù)2次，確保填料親水化。

脫鹽步驟

1、上樣

將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中。
注意：樣本pH需≤3（TFA調(diào)節(jié)），以增強(qiáng)肽段與C18的結(jié)合。

2、洗滌

每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復(fù)2-3次，去除鹽分和極性雜質(zhì)。
真空抽干或離心去除液體。

3、洗脫

加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板。
可重復(fù)洗脫1次以提高回收率。

4、干燥

合并洗脫液，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）。

關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化

1、流速控制

手動(dòng)操作時(shí)避免流速過(guò)快（依賴(lài)重力或離心）；自動(dòng)化平臺(tái)可調(diào)至1mL/ min。

2、有機(jī)相比例

洗脫ACN濃度需優(yōu)化（通常50-80%），過(guò)高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫。

3、樣本載量

避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否則會(huì)導(dǎo)致回收率低。

應(yīng)用場(chǎng)景

1、質(zhì)譜前處理

去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。

2、分級(jí)洗脫

與高pH反相分餾聯(lián)用，提高肽段覆蓋度。

3、自動(dòng)化整合

適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實(shí)現(xiàn)高通量。

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